反相色譜柱為色譜柱提供方便、經(jīng)濟(jì)和有效的保護(hù)，延長(zhǎng)了色譜柱的壽命，分析結(jié)果的重現(xiàn)性。隨著使用時(shí)間的增加，高效液相色譜柱分離效能下降，柱壓增高，其原因主要是由于色譜柱進(jìn)口段的少量填料被污染引起的，而色譜柱整個(gè)柱床并未被破壞，使用保護(hù)柱，相當(dāng)于在色譜柱前增加了一段額外的填料，起到了保護(hù)整個(gè)色譜柱的作用。

　　反相色譜柱特點(diǎn)：

　　采用高度可控的單分子層形成和封尾技術(shù)；

　　高的柱間重現(xiàn)性；

　　高的選擇性和分離效率；

　　適合分離酸性、中性和堿性化合物，以及許多藥物和多肽等。

　　反相色譜柱在使用緩沖液的過(guò)程中還要注意以下幾點(diǎn)：

　　1.避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對(duì)鋼質(zhì)有腐蝕作用；

　　2.緩沖液要現(xiàn)配現(xiàn)用，往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液，隔天或放置長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)發(fā)生很多怪現(xiàn)象；

　　3.使用緩沖液要及時(shí)掌握pH范圍，做到胸中有數(shù)；

　　4.清洗液路和柱子時(shí)，有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗；

　　5.長(zhǎng)時(shí)間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無(wú)析出，若有白色鹽類析出，定期用10%硝酸沖洗液路可以避免液路的堵塞；

　　6.反相色譜柱選擇緩沖液要用合適的試劑，避免不純的鹽類造成不必要的麻煩；

　　過(guò)渡流動(dòng)相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動(dòng)相相同，但是不含緩沖鹽的溶液。